咪唑类离子液体提取沙棘叶总黄酮的研究（一） 不仅被开发成沙棘食品

沙棘（拉丁名：HippophaerhamnoidesL）为胡颓子科沙棘属植物，咪唑别名醋柳，类离是液体叶总一种落叶性灌木，不仅被开发成沙棘食品，沙棘也被中国中医药典和世界药典广泛人药，黄酮是咪唑一种药食同源植物。中国的类离沙棘资源极其丰富，大力开发沙棘制品，液体叶总提高其附加价值具有重要意义。沙棘沙棘叶因其丰富的黄酮活性成分，具有独特的咪唑药理功效，开发沙棘叶食用及药用产品，类离需要对沙棘叶的液体叶总活性成分进行更为精准有效的提取分析。黄酮作为沙棘叶的沙棘重要成分，有很高的黄酮药用价值和食用保健价值，医学研究表明，黄酮类化合物具有抗心肌缺血、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、抗菌、降血糖、降血脂、消除体内自由基等作用。因此，研究沙棘叶中黄酮化合物的提取，开发沙棘食品及药品有着重要的意义。

离子液体是指由有机阳离子和阴离子（无机或有机）组成的一类熔融盐，是一类极具广泛利用前景及发展潜力的绿色环保溶剂。与传统有机溶剂相比，离子液体具有沸点高、热稳定性好、液态范围宽、不易燃、不挥发、溶解能力强等优良特性。此外，离子液体对微波具有强的吸收和热转换能力。而微波辅助提取天然产物中有效成分的技术又具备快速、清洁、高效、提取率高、溶剂用量少、操作简便等优点。近年来，结合二者的特点，将微波一离子液体辅助提取技术应用在天然产物有效成分分离与提取不断见诸于文献报道。目前，沙棘叶总黄酮的提取方法主要有水提法、有机溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法和超临界流体萃取法。基于课题组对离子液体及沙棘的研究，本研究将咪唑类离子液体用于沙棘叶总黄酮的提取，考察微波时间、微波功率、微波温度、料液比以及离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑浓度对提取效果的影响，通过正交试验优化最佳提取条件，为沙棘叶的开发和有效利用提供方法和理论依据。

一、材料与方法

1、材料与仪器

（1）主要试剂

沙棘叶（采自山西省偏关县）；芦丁标准品（纯度≥95％，国药集团化学试剂有限公司）；1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）（日本东京化成工业株式会社）；N-甲基咪唑（上海麦克林生化科技有限公司）；甲苯（天津市风船化学试剂科技有限公司）；溴代乙烷、溴代正丁烷、溴代正己烷、溴代正辛烷、溴代正癸烷、溴代十二烷（天津市光复精细化工研究所）。

（2）主要仪器

XH200A电脑微波固液相合成/萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司）；UV一2550紫外-可见分光光度计（岛津公司）；OE一100克样品粉碎机（浙江省武义县屹立工具有限公司）；科华KHBST一360酶标仪（上海科华实验系统有限公司）。

2、方法

（1）咪唑类离子液体的合成

参照文献合成方法，准确量取50mL甲苯、20mL（0.25m01）Ⅳ-甲基咪唑于250mL的两口圆底烧瓶中，然后将0.25mol溴代烃滴加于反应瓶中，氮气保护下，缓慢升温至95℃，在此温度下搅拌回流48h，冷却至室温，快速倾去上层甲苯层，将下层浅黄色液体用30mL乙酸乙酯洗涤3次，将洗涤后的产品抽真空干燥处理12h，几乎以定量的产率得6种咪唑类离子液体。

（2）芦丁标准曲线制作

用60％的乙醇配制质量浓度为0.402mg·mL^-1的芦丁标准溶液。取6个25mL的容量瓶，分别移入0mL、lmL、2mL、3mL、4mL、5mL上述标准溶液。加入显色剂后用60％乙醇定容至25mL。于510nm处测吸光度，绘制标准曲线。得回归方程为：y=10.771x+0.0202，R²=0.9997。

（3）总黄酮含量及提取率测定

于100mL圆底烧瓶中加入1.00g磨碎的未洗阴干沙棘叶，在不同条件下提取总黄酮，冷却后减压抽滤，滤饼用60％乙醇洗涤三次，所得滤液用60％乙醇定容到100mL容量瓶中。量取lmL提取液于25mL容量瓶中，然后加入显色剂，用60％的乙醇定容至刻度。以0mL提取液为参比，测定其吸光度值。三次平行试验后求平均值。

参考文献得，沙棘叶总黄酮提取率计算式：

c：沙棘叶中总黄酮浓度，单位：mg·mL^-1；N：稀释倍数，v：样品体积，单位：mL；m：沙棘叶质量，单位：g。

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相关链接：芦丁，2-三硝基苯，甲基咪唑，溴代正辛烷

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